Empleo de probióticos en esponjas intravaginales ovinas

Recientes estudios (Martínez-Ros et al., 2018) han descrito que otros dispositivos intravaginales como los CIDRs (basados en el silicio impregnado en progesterona natural), también producen descargas vaginales aunque éstas no son tan severas a las observadas con esponjas, posiblemente debido a su composición. Se ha observado además que los porcentajes de ovejas con secreciones vaginales purulentas o sanguinolentas aumentan cuando se emplean esponjas intravaginales de poliuretano con protocolos de sincronización tradicionales o largos (14 días) y pueden disminuir en un 10% cuando se emplean protocolos cortos de 7 días (Martínez-Ros et al., 2018).

Estas alteraciones asociadas al uso de esponjas vaginales pueden afectar incluso a la fertilidad en los pequeños rumiantes (Scudamore et al., 1988). Una de las consecuencias, es la alteración de la diversidad de la microbiota vaginal (Manes et al., 2015), es decir, de aquellas comunidades de agentes microbiológicos que viven de forma habitual en la vagina. Cuando la cantidad de estas poblaciones bacterianas se desequilibra, acontece lo que se llama una disbiosis vaginal. Bacterias patógenas proliferan y aumentan en este caso, en número suficiente para producir una enfermedad. Son varias las causas de disbiosis vaginal pero el estrés o el abuso en el uso de los antibióticos (que matan también a poblaciones de bacterias no patógenas), son dos causas importantes. Por otro lado, tampoco podemos obviar que la entrada de grandes cantidades de bacterias patógenas en la vagina, como consecuencia de su manipulación no higiénica (Martínez-Ros et al., 2018) o de malformaciones anatómicas que permiten la entrada de orina (Prado et al., 2007) está detrás de las vaginosis en los mamíferos. Algunos estudios han evidenciado que el empleo de esponjas vaginales impregnadas con antibióticos (precisamente para prevenir estas vaginosis), suponen un riesgo ya que podrían detectarse residuos antimicrobianos en la leche de pequeños rumiantes (Romero et al., 2016). En este sentido, es importante no administrar antimicrobianos de forma profiláctica sin la conveniente justificación analítica, y velar siempre por un uso coherente de los mismos, al objeto de reducir el riesgo de generar resistencias (PRAN, 2018).

La competencia por nutrientes o las modificaciones del medio, son dos de los efectos beneficiosos de bacterias no patógenas como los ‘Lactobacillus spp’. En la mujer, estas especies bacterianas que forman parte de las Bacterias Ácido Lácticas (BAL), abundan en la vagina y se encargan de mantener un pH ácido, lo que impide el crecimiento de bacterias no deseables y hongos. Cuando acontece una disbiosis vaginal, el pH aumenta y proliferan otras bacterias patógenas. El uso del pH como herramienta antibacteriana, fue descrito previamente (Gómez-Martín et al., 2015) en un estudio ‘in vitro’ como una estrategia alternativa al uso de antibióticos. De esta manera, se inhibía el crecimiento de agentes etiológicos de la agalaxia contagiosa, enfermedad de los pequeños rumiantes de gran impacto en el sector. Este estudio, desarrollado en la Universidad de Murcia (UMU), supuso el punto de partida de la línea de investigación ‘Búsqueda de Alternativas al uso de Antibióticos’, del Grupo de Investigación Agentes Microbiológicos Asociados a la Reproducción (ProVaginBIO), de la Universidad CEU Cardenal Herrera (UCH-CEU) de Valencia.

Para llevar a cabo este objetivo, se realizó un estudio en el que se emplearon dos grupos de corderas en las que se llevó a cabo un protocolo de sincronización del celo con esponjas impregnadas en 20 mg de acetato de flugestona durante 14 días. A un grupo de ovejas (n=11) se le introdujo vía intravaginal con un catéter un inóculo no liofilizado en suspensión líquida (3.24 × 106 CFU/mL de ‘Lactobacillus spp.’) de una combinación bacteriana (60% ‘Lactobacillus crispatus’, 20% ‘Lactobacillus brevis’ y 20% ‘Lactobacillus gasseri’) justo antes de ponerle la esponja (Grupo Probiótico). Por el contrario, al otro grupo de ovejas (n=10) no se le adicionó ningún probiótico antes de introducirles la esponja, permaneciendo como ‘Grupo Control’.

Tras la retirada de la esponja, a todos los animales de los dos grupos se les administró vía intramuscular 350 IU gonadotropina coriónica equina (eCG) y a los dos días de retirada de la esponja (momento en que los animales estaban en celo) se les introdujeron a los moruecos (n=3) durante 4 días. Este estudio evaluó la presencia de BAL (entre las que se encuentran ‘Lactobacillus spp.’) y la diversidad bacteriana vaginal mediante cultivos microbiológicos generales y selectivos antes de poner las esponjas (Tiempo 0), durante el celo (Tiempo estro) y a los 50 días después de la retirada de la esponja (Tiempo gestación). En esos tiempos, también se llevó a cabo un estudio citológico vaginal. En el ‘Tiempo gestación’, se realizó el diagnóstico ecográfico de la gestación (fertilidad). Además, se evaluó el estado de salud de los animales durante todo el estudio mediante inspección clínica y monitorización de la temperatura rectal.

De este estudio, también se desprendieron datos que evidencian la vaginosis acontecida en estas hembras sincronizadas con esponjas durante 14 días y sus repercusiones sobre la diversidad bacteriana vaginal cultivable. En efecto, se observó una inestabilidad de las poblaciones bacterianas de enterobacterias y BAL a lo largo del tiempo y a nivel individual en los animales. Estas oscilaciones de enterobacterias y BAL también han sido observadas en el tracto reproductor de las vacas (Jeon et al., 2015; Santos et al., 2012). Acorde a otros autores (Swartz et al., 2014), corroboramos que estas BAL son escasas en la microbiota vaginal ovina observando en nuestro caso que esta presencia era independiente del tiempo evaluado. En ganado bovino, estas bacterias han sido empleadas para inhibir patógenos causantes de metritis (Otero et al., 2006). Queda aún por determinar el verdadero papel de estas bacterias capaces de acidificar el medio, en la microbiota vaginal ovina.

Por otro lado, las enterobacterias observadas en el estudio fueron aisladas con frecuencia en la vagina de las corderas sincronizadas. Un dato interesante, es que pudimos corroborar de forma estadísticamente significativa que cuanto mayor era la concentración de enterobacterias menor era la diversidad de la microbiota. Este dato corrobora la hipótesis de que existe una necesidad de llevar a cabo estrategias que favorezcan la diversidad vaginal ovina en ausencia de uso de antibióticos. Aunque estas enterobacterias pueden proceder de un origen fecal, debido al estrecho contacto entre la vagina y el ano (Clemmons et al., 2017), no debemos descartar (en relación al manejo llevado a cabo en las granjas) un origen de la contaminación fundamentado en malas prácticas higiénicas en torno a la introducción de las esponjas intravaginales. Así pues, en base a nuestro criterio, habrían de ser siempre implementadas unas extremadas pautas higiénicas en torno a la implantación de dispositivos intravaginales tales como: limpieza y desinfección de la vulva antes de poner las esponjas (por ejemplo clorhexidina seguida de un secado con papel), desinfección del dispositivo empleado para implantar esponjas entre animales o uso siempre de guantes estériles.

En cuanto a las perspectivas de futuro, la unión de recursos por parte del Grupo de Investigación ProVaginBIO de la Universidad UCH-CEU de Valencia y el Grupo de Investigación Sanidad de Rumiantes de la UMU, está motivando una estrecha colaboración y ensayos con el apoyo de asociaciones ganaderas ovinas como Assafe, Agrama y Confelac o centros de selección y mejora genética como Ovigén.

Agradecimientos

El trabajo del grupo ProVaginBIO se ha financiado con fondos de la Universidad Cardenal Herrera-CEU, CEU Universities: Proyectos IDOC 17-18 y FUSP-Santander (I.P. Ángel Gómez-Martín); Grupos Precompetitivos CEU-Santander (FUSP-BS-PPC14/2016) (I.P. Empar García-Roselló). Cuenta además con el apoyo económico del convenio de I+D+i (I.P Ángel Gómez Martín) vinculado al Proyecto Grupos Operativos Supraautonómicos (REPROVI) del Programa Nacional Desarrollo Rural, Ministerio de Agricultura Pesca y Alimentación y FEADER (20190020007437), del que la Universidad de Murcia forma parte como grupo operativo (I.P. Christian de la Fe). Juan José Quereda es contratado “Ramón y Cajal” del Ministerio Español de Ciencia, Innovación y Universidades (RYC-2018-024985-I). Marion Toquet disfruta de un contrato FPI CEU-UCH. Agradecer a los alumnos colaboradores del grupo ProVaginBIO por toda la ayuda que siempre nos prestan.

Referencias

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• Programa para el uso razonable de antibióticos en ovino y caprino. 2018 (PRAN). Plan Nacional de resistencia a antibióticos. Agencia española de medicamentos y productos sanitarios (AEMPS). www.resistenciaantibióticos.es/es/programa-para-el-uso-razonable-de-antibioticos-en-ovino-y-caprino