Estrategia analítica para la detección de residuos de antibióticos en leche de pequeños rumiantes
María del Carmen Beltrán Martínez presentó una tesis doctoral en la Universidad Politécnica de Valencia titulada ‘ Estrategia analítica para la detección de residuos de antibióticos en leche de pequeños rumiantes’, en la que se aportan novedades sobre métodos microbiológicos y ensayos rápidos para esa detección de antibióticos.
En los países mediterráneos, la producción de leche de oveja y de cabra se ha destinado tradicionalmente a la fabricación de queso, a menudo a partir de leche cruda. La calidad del queso está estrechamente relacionada con la composición de la leche pero también con aspectos higiénicos actualmente regulados por la legislación europea, como el recuento de células somáticas, la bacteriología o la presencia de residuos de antibióticos.
Las implicaciones de la presencia de residuos de antibióticos en la leche, como resultado de los tratamientos veterinarios, incluyen efectos negativos sobre la salud del consumidor tales como alergias o resistencias bacterianas a los antibióticos y, también, problemas en la fabricación de productos lácteos fermentados. Para la detección de residuos de antibióticos en las muestras de leche existen varios métodos de cribado disponibles siendo los métodos basados en la inhibición del crecimiento microbiano y los ensayos a base de receptores específicos los más utilizados en granjas, industrias lácteas y laboratorios de control. Estos métodos de cribado han sido validados para su uso en leche cruda de vaca, pero la información sobre los resultados de estas pruebas en leche de oveja y cabra es bastante limitada.
El objetivo de este estudio ha sido evaluar el funcionamiento de algunos métodos microbiológicos y ensayos rápidos de receptores para la detección de antibióticos en leche de oveja y cabra según la Decisión 657/2002/CE, con objeto de determinar su idoneidad para controlar la presencia de residuos de antibióticos en la leche y establecer la estrategia analítica más conveniente en España.
La capacidad de detección (CCβ) de los métodos microbiológicos de cribado, BRT MRL, Delvotest MCS SP-NT, Delvotest MCS Accelerator y Eclipse 100, fue igual o inferior a los límites máximos de residuos (LMRs) establecidos por la legislación europea para la mayor parte de antibióticos betalactámicos estudiados y otros no betalactámicos como neomicina, tilosina, sulfadiazina y sulfadimetoxina. Sin embargo, fueron menos sensibles para detectar quinolonas y tetraciclinas a sus respectivos niveles de seguridad. Cuando se analizaron muestras de leche individuales, los tests microbiológicos presentaron una mayor ocurrencia de resultados no conformes para la leche de oveja que estuvo relacionada en todos los casos, con un recuento elevado de células somáticas (RCS).
El sistema microbiológico formado por dos microplacas complementarias basadas en la utilización de ‘Geobacillus stearothermophilus var. calidolactis’ y ‘Bacillus subtilis’, respectivamente, permite mejorar los niveles de detección en leche de oveja con respecto al uso de un único test comercial empleando ‘G. stearothermophilus’, al detectar algunas sustancias del grupo de las quinolonas y de los macrólidos a concentraciones más próximas a sus respectivos LMRs.
Los ensayos rápidos de receptores (Charm MRL BLTET, Betastar Combo, SNAP Betalactam, SNAP Tetracycline y Twinsensor BT) fueron adecuados para detectar la mayor parte de betalactámicos y tetraciclinas a concentraciones iguales o inferiores a los LMRs (CCβ≤MRL). La especificidad de los tests de receptores fue elevada en todos los casos incluso cuando se analizaron muestras de leche individuales. Únicamente el test Twinsensor BT presentó resultados no conformes cuando se analizaron muestras libres de antibióticos procedentes de animales individuales, especialmente en las últimas semanas de lactación. No se observaron reacciones cruzadas con la presencia de sustancias pertenecientes a otras familias de antibióticos distintas a las de betalactámicos y tetraciclinas en la leche. El conservante azidiol no tuvo ningún efecto sobre la respuesta de los tests de receptores. Además, no se encontraron diferencias entre la interpretación visual y la instrumental de los resultados.
Teniendo en cuenta la frecuencia de uso de los antibióticos comúnmente empleados en España y la sensibilidad de los métodos a una concentración de antibiótico equivalente al LMR, se calcularon los ratios totales de detección en el cribado. En general, el uso de un solo test permite detectar 62,8-82,4% de los antibióticos empleados. Para la leche de oveja, el rango total de detección alcanzado con los métodos microbiológicos fue significativamente mayor que el alcanzado con las pruebas rápidas de receptores. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas entre los dos tipos de tests cuando se analizó leche de cabra. En ambos tipos de leche, el uso simultáneo de dos tests de cribado con diferente base analítica, incrementó significativamente el rango total de detección alcanzando valores ≥90 % en algunos casos.
Sin embargo, antibióticos tales como enrofloxacina, marbofloxacina, espiramicina y estreptomicina que también se utilizan para tratar la mamitis y otras enfermedades infecciosas del ganado, no son detectadas por los tests de cribado evaluados. Por tanto, la mejora de la estrategia analítica a través de la aplicación periódica de pruebas capaces de detectar la presencia de estas sustancias a los niveles de seguridad establecidos sería recomendable.
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