Diferenciación de razas de Fusarium
Fusarium sp. Link es un hongo cosmopolita responsable de marchitamiento y enfermedades de la corteza de más de 100 plantas de importancia económica. La mayoría del marchitamiento vascular debido a Fusarium se debe a la especie F. oxysporum.
Artículo publicado en la Revista Horticultura 145 - Junio 2000.
Fusarium sp. Link es un hongo cosmopolita responsable de marchitamiento y enfermedades de la corteza de más de 100 plantas de importancia económica. La mayoría del marchitamiento vascular debido a Fusarium se debe a la especie F. oxysporum. Una característica importante del género es su capacidad para cambiar, tanto morfológica como fisiológicamente, en un ambiente nuevo. Por este motivo, la identificación presenta ciertos problemas.
La reacción en cadena de la polimerasa (PCR, polymerase chain reaction) se ha convertido rápidamente en una de las técnicas más utilizadas en biología molecular. Proporciona un método simple y económico para amplificar potencialmente secuencias específicas de ADN (ácido desoxiribo nucléico) mediante la síntesis en vitro de ADN. La prueba del «ADN polimórfico amplificado al azar» (RAPD, random amplified polymorphic DNA) es un ensayo basado en la PCR que usa primers individuales de una secuencia de nucleótidos al azar. Los polimorfismos detectados se denominan «marcadores RAPD». El contenido de información de cualquier marcador RAPD es muy bajo. Sólo cuando se usan muchos de estos marcadores anónimos para desarrollar una matriz de primers es cuando comienzan a tener utilidad.
El objetivo de este estudio es diferenciar cuatro diferentes Fusarium spp. aislados de Cyclamen persicum Mill. mediante el perfil combinado de varios primers. Para este fin, a partir de estos aislados de Fusarium se separaron primers RAPD con 10 a 16 bases de longitud. Los que mostraban polimorfismo se utilizaron para desarrollar una matriz de primers que debía ensayarse para comprobar su aplicabilidad.
Se incocularon plantas de cyclamen del cultivar Leuchtfeuer, altamente susceptible, con los siguientes Fusarium spp.: Fusarium oxysporum f. sp. cyclaminis, F. oxysporum f. sp. freesii, F. oxysporum f. sp. dianthi, F. oxysporum f. sp. callistephi, F. lateritium, F. equiseti y la línea no patógena F. oxysporum raza FO47. Los Fusarium spp. reaislados que mostraron síntomas de marchitamiento se utilizaron para analizar la aplicabilidad práctica de la matriz desarrollada.
Las siete líneas con las que se inocularon las plantas de cyclamen se distinguen por el perfil combinado de 4 primers RAPD: M13 (5´-GAG GGT GGC GGT TCT-3´), K16 (5´-GTC CTC GTC GTC GTC-3´), be6 (5´-GAC AGA CAG ACA GAC A-3´) de la empresa Gesellschaft für molekularbiologische Technologien und Diagnostik mbH, de Göttingen, y A02 (5´-TGC CGA GCT G-3´), de Roth GmbH+Co., Karlsruhe. El cuadro muestra la matriz de primers. Los campos individuales indican qué primers deben emplearse para distinguir entre dos aislamientos.
Se reaislaron 139 muestras de hongos y se prepararon para la extracción del ADN. A pesar que 126 Fusarium spp. ser verificaron adecuadamente, la técnica RAPD-PCR reveló 10 patrones de ADN que no pudieron asociarse con las líneas utilizadas originalmente para inocular las plantas. Esto permite suponer que hubo infecciones mixtas, no detectadas por la investigación morfológica. El trabajo futuro debe concentrarse en la investigación del comportamiento de más de un ADN fúngico en una solución que se ensaye mediante el análisis RAPD.
La técnica RAPD-PCR produce patrones de bandas fiables para la verificación y diferenciación de Fusarium spp. El análisis RAPD no sólo es útil para aclarar aspectos de las interacciones huésped/patógeno o infecciones múltiples; también ayuda a entender las interacciones entre los Fusarium spp. patógenos y no patógenos. Los primers al azar pueden utilizarse para optimizar el uso práctico del no patogénico FO47 en sustratos comerciales.
