Mamitis clínicas en caprino y resistencias a antimicrobianos

La mamitis es la patología más relevante en el sector caprino de leche debido a las pérdidas económicas que genera. Esto sugiere la necesidad de conocer los principales agentes causantes de este proceso. Para ello, se analizaron un total de 86 muestras de 24 explotaciones de aptitud lechera de la provincia de Cáceres. Las muestras de leche se obtuvieron de animales con signos clínicos evidentes de inflamación mamaria. Tras el procesado, se observó crecimiento bacteriano en el 72% de las muestras. Un total de 16 géneros fueron identificados, siendo Staphylococcus spp. el agente microbiano más frecuente. Además, se determinó la sensibilidad in vitro a diferentes antimicrobianos, estableciéndose la marbofloxacina como el antimicrobiano testado que mayor porcentaje de sensibilidad ofrece.

En los últimos años, la reestructuración y modernización del sector caprino de leche, así como la especialización del ganado con el aumento de razas seleccionadas en régimen intensivo, acarrea un incremento de la producción de leche por animal y, consecuentemente, la mejora del rendimiento de los rebaños. La producción de leche caprina en España obtiene casi 470 toneladas anuales, alcanzando la producción máxima durante los meses de marzo a julio. Es el segundo país con mayor producción de leche de cabra de la Unión Europea, con un censo de 2,6 millones de cabezas. A nivel nacional, Extremadura ostenta el tercer puesto de la cabaña nacional caprina, con una producción total láctea del 8% (MAPA, 2021a). Sin embargo, la intensificación de la producción lechera provoca un gran desgaste de la glándula mamaria y, por consiguiente, un mayor riesgo de producir patologías que afectan a la calidad de la leche y al bienestar animal. Por tanto, el cuidado, estudio y tratamiento de este órgano es la piedra angular sobre la que se sustentan las explotaciones lecheras.

La inflamación de la glándula mamaria, conocida como mastitis o mamitis, es la enfermedad más importante en el sector. Esta patología afecta a la calidad de la leche, a la producción y, en consecuencia, a la rentabilidad (Gazzola et al., 2021). Las pérdidas económicas se deben al incremento de la tasa de reposición y a los gastos en diagnóstico y tratamiento (Andrade et al., 2021; Toquet et al., 2021). Desde el comienzo de la intensificación en la producción de leche, se han buscado métodos de manejo y ordeño efectivos para minimizar la casuística de la mamitis. Las medidas adoptadas como la desinfección de los pezones, los procedimientos de ordeño higiénicos o el uso estratégico de terapia con antibióticos durante el secado consiguen controlar el desarrollo de la enfermedad (Ruegg, 2017).

En lo que respecta a la etiología del proceso, la mamitis se atribuye a agentes causales diversos como: factores ambientales, factores fisiológicos y microorganismos patógenos. Este último, se desarrolla cuando el patógeno invade el canal del pezón y el tejido de la ubre, desencadenado una infección en la glándula mamaria, denominándose mamitis infecciosa.

La elevada prevalencia del origen infeccioso en esta patología, ligado al peligro para la salud pública por el riesgo que suponen algunos patógenos vehiculados en la leche, pone de manifiesto la necesidad de conocer los microorganismos causales de la mamitis. Además, la preocupación actual por el auge de las resistencias antimicrobianas sugiere evitar el uso de tratamientos ineficaces y establecer la susceptibilidad a los antimicrobianos. Por ello, el presente estudio busca proporcionar información acerca de los diversos patógenos implicados en las mamitis de la especie caprina y el análisis de la sensibilidad antimicrobiana de las bacterias aisladas en la investigación, con el objetivo de orientar el uso de estos antimicrobianos de forma eficaz en el tratamiento de futuras infecciones intramamarias caprinas.

La inflamación de la glándula mamaria provoca alteraciones físicas, químicas, patológicas y microbiológicas en la leche. Esto conlleva la disminución de la calidad y la cantidad de la producción lechera (Andrade et al., 2021; Toquet et al., 2021). Además, puede provocar el descenso de la fertilidad de las hembras y el estatus inmunitario de sus crías (Gonzalo-Abascal, 2017). Sin embargo, las alteraciones en cada individuo pueden presentarse de diversa manera. Concretamente, la mamitis puede presentarse en dos formas: subclínica o moderada y clínica o severa. En el primer caso, la ubre sufre la afección intramamaria sin evidencias macroscópicas de signos clínicos, lo que dificulta el diagnóstico temprano. Además, esas ubres son un reservorio microbiológico para el resto del rebaño al pasar desapercibidas.

Mientras en la forma clínica, los signos y síntomas como la inflamación, la sensibilidad a la palpación, la induración, el aumento de temperatura y el aumento de tamaño de los ganglios supramamarios se evidencian en la ubre. Así como, los cambios en las propiedades organolépticas de la leche con la aparición de flóculos, secreciones purulentas y/o hilos de fibrina (Micheloud et al., 2014). Por tanto, el diagnóstico de esta forma es factible mediante el examen de la ubre y de la leche.

La aparición de formas subclínicas es más frecuente que las clínicas, estableciéndose la prevalencia de las primeras entre el 5-30% (Gonzalo-Abascal, 2017). Al tiempo que, la incidencia anual de las mamitis clínicas es menor al 5% (Micheloud et al., 2014).

Los principales agentes bacterianos descritos en la bibliografía causantes de mastitis en cabras son Staphylococcus spp., Streptococcus spp., E. coli y Pseudomonas aeruginosa (Jabbar et al., 2020). No obstante, Staphylocococcus spp. se describe como el más frecuente, suponiendo el 75% de los casos de mastitis en cabras y ovejas (Michael et al., 2021).

Crecimiento de colonias de Staphylococcus spp. en el medio de cultivo Agar Sangre (AS).

En lo que se refiere al diagnóstico de las mamitis, para la detección de mamitis subclínicas las técnicas utilizadas son el recuento de células somáticas (RCS). El RCS es un indicador de calidad de la leche y del estado sanitario de la ubre (Gonzalo-Abascal, 2017), ya que un proceso inflamatorio se traduce en el aumento de células somáticas. Otra técnica diagnóstica indirecta es el Test de California, conocida como California Mastitis Test (CMT). Es una técnica muy utilizada para la detección de mamitis subclínicas debido a la facilidad de uso y a su correlación con el RCS (Escoda-Gutiérrez, 2012).

En lo que respecta a las mamitis clínicas, su diagnóstico es facilitado por los cambios macroscópico en la ubre y en la leche. No obstante, para la determinación de los microorganismos causantes en casos de mamitis infecciosas, el método diagnóstico recomendado es el cultivo bacteriológico (Toquet et al., 2021).

El desarrollo de resistencias a los antimicrobianos (RAM) es un fenómeno natural. Las bacterias tienen la capacidad de cambiar y se hacen resistentes frente a los mecanismos de acción de los antibióticos. Pese a que los antimicrobianos llevan utilizándose desde apenas cien años en el ámbito médico y veterinario, el uso exacerbado de estos compuestos incrementa la selección y propagación de bacterias resistentes suponiendo un problema de gran magnitud para la salud pública, debido a la pérdida de eficacia de los tratamientos disponibles.

Por este motivo, en la lucha contra las RAM, se ha establecido la recogida de muestras microbiológicas para realización de cultivos y la determinación de la sensibilidad bacteriana mediante la realización de antibiogramas, con el objetivo de reducir el uso de antimicrobianos en la ganadería y, disminuir o al menos retrasar la aparición de las resistencias antimicrobianas.

Muestras analizadas

Para la realización del presente estudio, se analizaron un total de 86 muestras de leche de cabra procedentes de 24 explotaciones de la provincia de Cáceres en periodo de 8 meses. Las razas caprinas fueron Verata, Murciano-Granadina y Florida. Cada muestra procedía de un único animal que presentaba ciertos indicios de mamitis en las ubres, como retracción asimétrica de las ubres, cambios en los ganglios supramamarios y palpación de pequeños nódulos. Para la toma de muestras se realizó una limpieza previa del pezón con alcohol de 70º y papel desechable. Además, se descartaron los primeros chorros de leche de cada ubre antes de ser recogidos 10ml en botes estériles correctamente identificados.

Estudio microbiológico

Para el estudio microbiológico, las muestras se analizaron en el Laboratorio de Diagnóstico de la Unidad de Patología Infecciosa de la Facultad de Veterinaria de Cáceres. En el procesado se realizó siembra por agotamiento inoculando 20μl de leche en medio Agar Sangre (AS) y Agar McConkey (MCK). Seguidamente, se incubaron en condiciones de aerobiosis a 37°C durante 24-72 horas. Los crecimientos obtenidos se sometieron a diversas pruebas bioquímicas para la identificación del microorganismo.

Asimismo, para el aislamiento de Mycoplasma spp., las muestras se sembraron de forma masiva en el medio Agar PPLO (Pleuro Pneumoniae-Like Organisms), incubándose en condiciones de microaerofilia a 37°C, durante un período máximo de 15 días. La morfología de estas colonias se observa al microscopio con un aumento 10x, y son denominadas colonias en forma de ‘huevo frito’ (Markey y col., 2013).

Pruebas de sensibilidad antimicrobiana

Para la determinación de la susceptibilidad de las bacterias frente a los antimicrobianos, se utilizaron pruebas de sensibilidad in vitro, a través del método de Kirby-Bauer o también denominado método de difusión en disco en agar. Los antimicrobianos testados pertenece a diferentes familias y fueron seleccionados por su frecuente utilización en el tratamiento de la mamitis: Ampicilina (10 μg), Cefalexina (30 μg), Enrofloxacina (5μg), Florfenicol (30 μg), Sulfatrimetoprim (25 μg), Marbofloxacina (5 μg), Tilosina (30μg) y Tetraciclina (30 μg). Por otra parte, a excepción del resto de microorganismos estudiados, los aislados de Mycoplasma spp. no fueron testado con la prueba de sensibilidad antimicrobiana, ya que la técnica empleada no es viable para esta bacteria.

Para validar los resultados de los antibiogramas, se siguieron las normas internacionales publicadas por Clinical Laboratory Standars Institute (CLSI), los cuales establecen los denominados puntos de corte con que se diferencian las categorías clínicas de tratamiento y la probabilidad del éxito o del fracaso terapéutico (Cantón, 2010).

• Sensible (S): Cuando un crecimiento microbiológico es inhibido in vitro a una concentración antibiótica utilizando la dosis recomendada y asociado a una alta probabilidad de éxito terapéutico.
• Intermedio (I): Cuando un crecimiento bacteriano está inhibido in vitro a la concentración antibiótica máxima o asociado a un efecto terapéutico incierto. Cuando se produce este resultado, el antimicrobiano en cuestión debería aplicarse únicamente por vía tópica, ya que así nos aseguramos de que toda la concentración del antimicrobiano va directamente al punto donde prolifera el microorganismo.
• Resistente (R): Cuando un crecimiento bacteriano no está inhibido in vitro a la concentración antibiótica utilizada normalmente y se asocia a alta probabilidad de fracaso terapéutico.

De las 86 muestras analizadas, 62 (72%) ofrecieron cultivos positivos, mientras que en 24 muestras (27,9%) no se observó crecimiento bacteriano. En el total de muestras positivas, el 20,9% (13/62) presentaron un crecimiento polimicrobiano, es decir, se aisló más de un género bacteriano en un mismo animal. Mientras que, en el 79% (49/62) de las muestras se registró un crecimiento puro, es decir un único agente patógeno fue responsable de la mamitis.

En lo referente a la etiología de las mamitis analizadas en esta investigación, y según se muestra en la Figura 1, el género bacteriano más prevalente fue Staphylococcus spp. con un 38,7%, seguido de Mycoplasma spp. (27,4%), Pasteurella spp. (11,2%) y E. coli (9,6%). Por otro lado, los menos prevalentes fueron Pseudomonas spp., Panoea spp., Enterococcus spp. y Enterobacter spp.

Por otro lado, cabe destacar que el 32,5% de las cepas eran resistentes a tres o más fármacos y únicamente el 11,6% de las cepas encontradas presentaron susceptibilidad a los ocho fármacos testados.

Dentro de los géneros bacterianos más prevalentes, en lo que respecta a las cepas de Staphylococcus spp. los antimicrobianos más eficaces fueron la marbofloxacina y la cefalexina, presentando en ambos casos una sensibilidad del 100%. Por otro lado, las mayores resistencias se encontraron para la ampicilina (51,9%) y la tilosina (41,1%) (Figura 3). En cuanto a las cepas de Pasteurella spp. (Figura 4), fueron sensibles a la ampicilina y a la cefalexina en el 100% de los casos. Por el contrario, la tilosina (66,6%), tetraciclina y sulfatrimetoprim (33,3%) fueron los antimicrobianos más resistentes. Finalmente, en las cepas de E. coli (Figura 5) se observó una sensibilidad del 100% a marbofloxacina, sulfatrimetorpim y enrofloxacina, a diferencia de la resistencia encontrada a la tilosina en el 100% de los casos.

Figura 5. Patrón de susceptibilidad de E. coli frente a antimicrobianos empleados en el tratamiento de las mamitis clínicas en cabras.

Conclusiones

• En el 72% de las muestras de leche analizadas se observó la presencia de al menos un género bacteriano.
• Staphylococcus spp. es el agente microbiano más frecuentemente aislado en las muestras analizadas, seguido de Mycoplasma spp.
• Se identifica a la marbofloxacina como el antimicrobiano testado que presenta mayor sensibilidad en la mayoría de los microorganismos aislados, a diferencia de la ampicilina que es el que mayores resistencias ofrece.
• Dada la diversidad de microorganismos que pueden participar en las mamitis caprinas y de sus perfiles de sensibilidad a antimicrobianos, se recomienda el envío de muestras a laboratorios especializados y realizar análisis microbiológicos ante la aparición de casos de mamitis en las explotaciones caprinas, para identificar específicamente los agentes, conocer su sensibilidad y evitar el desarrollo de resistencias.

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