nº 28 - pág 16 tierras CAPRINO] 2019 PPD bovina. Sin embargo, la especificidad de esta prueba no es del 100% y además supone un incremento en el coste económico del proceso diagnóstico y complica el procedimiento. Por ello, en los últimos años se está desarrollando un considerable esfuerzo investigador con fin de encontrar nuevos antígenos que sean capaces de evocar una respuesta inmunitaria más específica, evitando de esto modo la aparición de reacciones cruzadas en las pruebas diagnósticas. En el caso de la paratuberculosis, aunque la PPD aviar es ampliamente utilizada en su diagnóstico, también se ha elaborado johnina, una PPD propia de Map. También en este caso, en los últimos años, se han ido desarrollando nuevos antígenos, con el objetivo de mejorar no solo la especificidad, sino sobre todo la sensibilidad de los test diagnósticos de la infección por Mapusing the whole blood interferon-γ (IFN-γ). Por ello, se ha realizado también un estudio con el objetivo de analizar la respuesta inmunitaria celular mediante la técnica de IFN-γ, desarrollada por animales sensibilizados frente Map cuando eran expuestos a nuevos antígenos específicos de ‘M. bovis’ y Map. Se emplearon animales del primer (casos vacunados naturales) y segundo estudio (experimentales), en muestreos realizados a diferentes días post-vacunación, empleando como antígenos para estimular la sangre la PPD aviar y bovina, la johnina, dos cócteles peptídicos (PC-EC y PC-HP) de ‘M. bovis’ y los antígenos VK 055 y VK 067 de Map, todos ellos comerciales producidos por distintos laboratorios. No se observó producción específica de IFN-γ tras la estimulación de la sangre con los dos cócteles de ‘M. bovis’ en ningún animal vacunado ni en ningún muestreo, mientras que sí se obtuvo cuando se empleó la PPD bovina, lo que apoya su posible uso en las campañas de erradicación de la tuberculosis al mejorar la especificidad de la PPD bovina y al evitar las reacciones cruzadas. El principal inconveniente de estos reactivos, actualmente, es su elevado precio. En cambio, los dos antígenos de Map testados en este estudio, no mejoraron la sensibilidad de la johnina ni la PPD aviar en la detección de cabritos vacunados o infectados por Map, por lo que no están en condiciones de sustituirlas. CONCLUSIONES En resumen, como conclusiones de estos trabajos, se puede afirmar lo siguiente. La vacunación con la vacuna inactivada Gudair® ha mostrado ejercer una protección heteróloga, en un rebaño caprino de leche con historial de casos clínicos de paratuberculosis, ya que el número de bajas, por cualquier causa, se redujo significativamente entre los animales vacunados (14,13%) frente a los no vacunados (6,12%) durante un periodo de estudio de 21 meses. Este efecto ha sido más manifiesto en animales vacunados con 1,5 meses de edad. La vacunación actúa sobre la respuesta inmunitaria periférica celular y humoral específicas frente a Map. Dicha respuesta es detectable ya entre el primero y segundo mes tras la inmunización, y que persiste al menos entre 18 y 21 meses post vacunación. Dicha respuesta se ve influida por la edad a la que se vacunan los animales, siendo más intensa y duradera cuando se practica a los 5 meses e inferior en cabras adultas, y -en la respuesta inmunitaria celular-, por el estado previo de infección con Map, que provoca una reducción en su duración e intensidad respecto a los animales no infectados. La vacunación frente a paratuberculosis interfiere con la prueba de IDTB simple para el diagnóstico de la tuberculosis, como se ha comprobado en el estudio experimental. Esta interferencia disminuiría con el tiempo, ya que a los 6 meses post-vacunación no se encontraron reaccionantes positivos en el estudio de campo El empleo de una vacuna frente a paratuberculosis no impide la infección por Map de los animales, incluso cuando se aplica antes de la infección. Sin embargo, y solamente en aquellos animales infectados tras la vacunación, sí se consigue una reducción de la presencia de bacterias viables en los tejidos, al no aislarse en ningún animal, a diferencia del resto de grupos. La inoculación de la vacuna antes de la infección por Map tiene un claro efecto protector valorado mediante el estudio de las lesiones, ya que logra su limitación hacia formas focales y logra una significativa reducción de su intensidad con el tiempo. Sin embargo, no se ha podido demostrar de forma clara un posible efecto terapéutico de la vacuna, ya que se ha observado una gran variabilidad individual en la respuesta. Incluso, hay evidencias que sugieren que pudiera contribuir a exacerbar una infección previamente establecida, como el hecho de que el animal con mayor carga bacteriana y lesiones más graves encontrado, fuera un animal vacunado tras la infección. No existe una asociación directa evidente, entre la respuesta inmunitaria celular periférica, medida por la producción de IFN-γ, y la protección asociada a la vacunación, puesto que los animales con lesiones graves han mostrado niveles similares, o incluso más elevados, de esta citoquina, tras la estimulación de sangre circulante. Los cocteles peptídicos PC-EC and PC-HP derivados de ‘M. bovis’ pueden ser buenos candidatos para diferenciar animales vacunados de paratuberculosis de animales infectados con tuberculosis mediante la técnica IGRA, ya que no se observó ningún incremento en la producción de IFN-γ tras la estimulación de la sangre periférica con estos antígenos en las cabras vacunadas mientras que sí lo hubo al emplear PPD aviar, johnina o PPD bovina. Sin embargo, los antígenos de Map empleados (VK 055 y VK 067) no han mejorado la sensibilidad de la técnica de IFN-γ en la detección de animales vacunados o infectados por Map, en comparación con las PPDs (aviar o johnina). AGRADECIMIENTOS Al personal técnico y compañeros del Departamento de Sanidad Animal y del Instituto de Ganadería de Montaña, por su ayuda en la realización de los estudios. A Gonzalo Martínez Asensio, por su colaboración en parte de los trabajos. NOTA La bibliografía consultada y que apoya parte de la información recogida en el trabajo se encuentra en poder de los autores. ✔
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