Des de la Universitat de Xile s'ha validat un sistema de pronòstic primerenc de la pudrición àcida

La pudrición àcida dels préssecs causada per ‘Geotrichum candidum’ va passar de ser una malaltia ocasional a un problema de gran importància en préssecs produïts a Xile des de 2004. La malaltia va ser descrita causant pèrdues en postcosecha de préssecs i nectarinos d'exportació conreats principalment a la Regió Metropolitana i a la Regió del Libertador Bernardo O´Higgins (Pinilla, 2005b). La malaltia es caracteritza per ser una de les pudriciones més desagradables en la postcosecha de préssec, presentant-se a més en cireres i prunes.

‘G. candidum’ causa una pudrición tova dels fruits, on es produeix desintegració dels teixits, tant de l'epidermis com de la polpa (Figura 1A). Els fruits afectats exhalen una forta olor a fermentació i rancidez (Ogawa et al., 2000). En condicions d'alta humitat relativa s'evidencia la presència d'un micelio blanc d'aspecte yesoso (Figura 1B), usualment no filamentoso com en el cas d'altres patògens freqüents en postcosecha. Aquest fong a més presenta una fase de tipus levaduriforme, caracteritzada per un creixement unicel·lular amb multiplicació per yemación, que s'observa macroscópicamente com un desenvolupament mucoso.

Figura 1A (esq.): Pudrición tova caracteritzada per una conspícua maceración dels teixits, característica de la pudrición àcida causada per Geotrichum candidum. Figura 1B (dta.): Desenvolupament de micelio blanc en condicions d'humitat alta.

El patogen és un habitant comú dels sòls, on les seves poblacions són més abundants (Yaghmour et al., 2012). Està present en els horts i les seves poblacions augmenten sobre els fruits en la mesura que s'aproxima la collita. Aquesta situació es deu a l'increment de l'inòcul a la terra de l'hort producte dels fruits que cauen i són colonitzats per 'G. candidum'. La pols que es diposita sobre la fruita seria el principal acarreador de les espores del fong cap a la fruita.

És interessant que la malaltia hagi augmentat la seva importància a Xile gairebé en paral·lel amb el seu increment a Califòrnia (Michailides i Morgan, 2004), la qual cosa podria estar relacionat amb les varietats conreades. No obstant això, a diferència del que ocorre a Xile, a Califòrnia la fruita emmagatzemada en postcosecha desenvolupa la malaltia, mentre que els símptomes de pudrición àcida dels préssecs xilens s'observen majoritàriament als mercats de destinació, no obstant això, les contramuestras de fruita deixades en origen habitualment presenten baixos nivells de la malaltia.

'G. candidum' és un patogen oportunista que requereix de ferides per infectar els fruits i els símptomes de la malaltia s'han observat majoritàriament en varietats de maduració no uniforme

'G. candidum' és un patogen oportunista que requereix de ferides per infectar els fruits i els símptomes de la malaltia s'han observat majoritàriament en varietats de maduració desuniforme, on quillas i espatlles sofreixen un estovament més primerenc que la resta del fruit. Existeix una relació directa entre la maduresa de la fruita i el desenvolupament de la pudrición àcida (Yaghmour et al, 2012), a part d'aquesta major susceptibilitat, la fruita més madura és alhora més susceptible a sofrir ferides. A més, s'han observat danys en l'epidermis de la fruita que podrien ser d'origen químic o físic i que erròniament s'han atribuït al patogen, quan en realitat corresponen a lesions que el patogen aprofita per generar les infeccions (Figura 2).

Figura 2: Lesions superficials en l'epidermis d'un préssec del conrear Reach Lady inspeccionat en el moment de la seva arribada a el  mercat nord-americà.

Estudis in vitro realitzats per Pinilla (2005a) van demostrar que els fungicides propiconazole i tebuconazole són efectius en la inhibició del creixement de 'G. candidum'. Aquests actius s'utilitzen actualment en forma comercial sent aplicats 7 a 10 dies abans de la collita en aquells horts amb historial de la malaltia. Un altre aspecte important d'aquesta malaltia és que aquest patogen contamina les instal·lacions de les línies d'embalatge i des d'allí es distribueix a altres fruits, raó per la qual les centrals d'embalatge han acurat esforços en la desinfecció de les línies d'embalatge diàriament, especialment quan es realitzen els canvis de lots de fruita per evitar contaminacions entre la fruita provinent de diferents horts. Estudis realitzats per Yaghmour et al. (2012) van identificar la zona del buidatge de la fruita (muestreando la cinta que rep la fruita) com la de major presència d'inòcul de 'G. candidum', mentre que la zona dels raspalls va ser la de menor ocurrència del patogen.

La baixa freqüència d'aparició de la pudrición àcida en condicions d'emmagatzematge perllongat al país, fa difícil l'estudi de la malaltia. Per conèixer aspectes rellevants de l'epidemiologia i control de la malaltia hem desenvolupat una metodologia que ens permet observar les poblacions epífitas (sobre el teixit vegetal) del patogen sobre la fruita, la que consisteix bàsicament a congelar la fruita i posteriorment permetre el desenvolupament saprofítico del fong, determinant així la quantitat de fruits que presenten al patogen en la seva superfície. Addicionalment, hem desenvolupat un protocol que pot ser utilitzat per pronosticar la possible ocurrència d'aquesta patologia.

En la temporada 2007–2008 es va iniciar un primer estudi que s'inclinava a determinar l'efecte de fungicides aplicats en precosecha sobre la pudrición àcida en préssecs del cultiu Early Rich provinents d'una horta comercial amb historial de pudrición àcida, situat en Catemu, Sant Felipe. La fruita va ser tractada en forma comercial en l'horta amb 4 fungicides (Quadre 1) una setmana abans de la collita comercial. Posterior a la collita, la fruita es va embalar comercialment i es van emmagatzemar 4 caixes amb 40 fruits cadascuna, en frigorífic durant 35 dies, a 0 +/- 1 °C. Posteriorment, van ser deixades a temperatura ambienti 4 dies i es va determinar el percentatge de fruits amb desenvolupament de pudrición àcida. Aquells fruits que no van desenvolupar pudrición àcida van ser congelats a -17 °C durant 48 hores i després mantinguts en càmeres humides 4 dies més per finalment determinar el percentatge de fruits amb desenvolupament saprofítico de 'G. candidum'.

Els nivells de pudrición àcida observats en la fruita després de 35 dies d'emmagatzematge van ser molt baixos, sense que es poguessin extreure conclusions respecte de l'efectivitat dels tractaments químics realitzats en el camp. No obstant això, la majoria de la fruita de tots els tractaments (un 92% del total) va desenvolupar colònies de 'G. candidum' després d'haver estat congelada, evidenciant que la fruita presentava contaminació superficial amb el patogen (Quadre 1). Aquests resultats demostren que la sola presència d'inòcul sobre la fruita no és suficient per al desenvolupament de la pudrición àcida.

Quadre 1: Percentatge de préssecs Early Rich amb desenvolupament de pudrición àcida i desenvolupament de poblacions epífitas de 'G. candidum' després de ser tractats amb fungicides en precosecha, embalats en embalatge comercial i emmagatzemats 35 dies en frigorífic. El percentatge de poblacions epífitas es va determinar després d'haver congelat la fruita a -17 °C durant 4 dies. ^X Lletres iguals en les columnes indiquen diferències no significatives segons prova de comparació múltiple de Tukey (p < 0,05).

Per confirmar la utilitat de la metodologia de congelació i poder determinar fefaentment l'efectivitat dels tractaments fungicides, es va muntar un segon assaig en préssec del tipus Everts, situat en l'horta experimental de la Facultat de Ciències Agronómicas de la Universitat de Xile. La fruita va ser inoculada artificialment amb una suspensió d'1 x 105 conidias/ml del cep GNRDC de 'G. candidum' provinent de cultius purs de 7 dies, utilitzant un atomizador manual. Després, als 7 dies, la fruita va ser ruixada mitjançant atomizadores manuals amb diferents fungicides (Quadre 2) i collida una setmana més tard, sent immediatament congelada a -17 °C durant 4 dies perquè, després d'un període de 4 dies a temperatura ambienti, procedir a determinar el percentatge de fruits amb desenvolupament del patogen.

La fruita de l'horta experimental no va presentar contaminació amb el patogen, mentre que la fruita inoculada íntegrament va presentar desenvolupament de 'G. candidum', demostrant l'efectivitat de la inoculació realitzada. D'altra banda, tots els fungicides empleats van disminuir les poblacions epífitas del patogen, sent aquesta inhibició major amb propiconazole i amb tebuconazole (Quadre 2).

Quadre 2: Percentatge de préssecs Everts amb desenvolupament de poblacions epifitas de 'G. candidum' després de ser inoculats en l'arbre i tractats amb fungicides. El percentatge de poblacions epífitas es va determinar congelant la fruita a -17 °C. ^X Lletres iguals en les columnes indiquen diferències no significatives segons prova de comparació múltiple de Tukey (p < 0,05).

Per determinar l'efecte residual dels fungicides, es va dissenyar un nou assaig, en préssecs de la varietat Ross situats en la mateixa horta experimental, en la qual es van aplicar els fungicides 21 dies abans de la collita i després van ser inoculats amb el patogen als 1, 5, 10, 15 i 20 dies després del tractament fungicida. Després de la collita, els préssecs van ser sotmesos al procés de congelació prèviament descrit, determinant-se els percentatges de fruits amb desenvolupament de poblacions del patogen. L'assaig es va realitzar amb un disseny de blocs complets a l'atzar on cada bloc va correspondre a un arbre i en cada arbre es va considerar una repetició composta per 20 fruits per a cada tractament.

Aquest assaig va permetre evidenciar que els fungicides propiconzole i tebuconazole van presentar un efecte residual d'almenys 15 dies des de la seva aplicació, disminuint significativament les poblacions del patogen sobre els fruits (Figura 3). Aquests resultats al seu torn, van corroborar la necessitat que les aplicacions en les hortes es realitzin dins dels 15 dies anteriors a la collita. D'altra banda, l'extracte de cítric va reduir efectivament les poblacions del patogen durant els primers 5 dies, observant-se valors variables amb posterioritat. Aquests fungicides es caracteritzen per una curta efectivitat residual i per tant no hauria d'esperar-se un efecte sobre les poblacions del patogen més enllà d'uns 5 dies des de l'aplicació.

Figura 3: Poblacions epífitas de 'G. candidum' en préssecs Ross tractats amb fungicides i inoculats amb una suspensió conidial del patogen. El percentatge de poblacions epífitas es va determinar congelant la fruita a -17 °C. La comparació es va realitzar entre tractaments per a cada període d'aplicació, per separat. Lletres iguals en les columnes indiquen que no existeixen diferències significatives segons prova de comparació múltiple de Tukey (p < 0,05). Contaminacions per 'Rhizopus' van impedir un efectiu recompte de les poblacions del patogen en els préssecs tractats amb propiconazole als 5 dies, perdent-se aquesta informació.

Un dels problemes de la metodologia de congelamiento dels fruits és el desenvolupament de fongs sapròfits que dificulten el recompte de les colònies de 'G. candidum', especialment' Rhizopus', que creix ràpida i profusament, colonitzant gran part de la fruita i inhibint el desenvolupament d'altres fongs. El creixement de colònies de 'Penicillium', inicialment blanques i subcirculares poden a més ser confoses amb colònies de 'G. candidum'. En conseqüència, en la temporada 2008-2009 es va realitzar un assaig que va consistir a tractar amb fungicides la fruita abans de ser congelada amb l'objecte d'inhibir el creixement de sapròfits indesitjats i permetre la quantificació de les colònies de 'G. candidum'. Per a això es va utilitzar préssec Zee Lady provinents de tres hortes comercials amb historial de pudrición àcida, que van ser tractats per aspersión amb una combinació de fungicides (Quadre 3), sobre les mateixes safates en què es van col·locar a l'interior del congelador i després van ser congelats completament i incubats durant 4 dies. La fruita es va obtenir de la collita comercial i es van utilitzar 4 repeticions corresponents a 4 caixes de 48 fruits. Es va utilitzar el fungicida Dicloran orientat a inhibir el creixement de 'Rhizopus', en barreja amb Imazalil, Iprodione, Pyrimethanil o Benomilo, amb l'objecte d'ampliar l'espectre d'acció i inhibir el desenvolupament de contaminants tals com 'Penicillium' i 'Cladosporium', entre uns altres.

Quadre 3: Tractaments fungicides utilitzats per inhibir el desenvolupament de sapròfits indesitjats i permetre el recompte de les poblacions epífitas de G. candidum. ¹ Producte comercial per litre de solució.

Només 3 de les 4 barreges de fungicides van aconseguir incrementar el recompte de 'G. candidum' sobre els fruits (Quadre 4), observant-se una inhibició del creixement del patogen en préssecs tractats amb Dicloran + Imazalil, sent atribuïble aquest efecte a l'Imazalil. D'altra banda, 'Penicillium', 'Cladosporium' i 'Aspergillus' van ser inhibits per totes les barreges utilitzades, mentre que si ben 'Rhizopus' es desenvolupo sobre els préssecs, el seu creixement no va ser expansiu, permetent el creixement d'altres fongs, especialment de 'Geotrichum'.

Quadre 4: Percentatge de préssecs Zee Lady amb desenvolupament de colònies de diferents fongs sapròfits després de ser congelats durant 4 dies (Mitjana de tres hortes comercials amb historial de pudrición àcida). ^x La comptabilització de cada fong es va realitzar en tots els fruits, permetent que un mateix fruit fos enumerat més d'una vegada. ⁱ Lletres iguals en les columnes indiquen diferències no significatives segons prova de comparació múltiple de Tukey (p < 0,05).

Per determinar directament l'efecte dels fungicides sobre el patogen es va dissenyar un altre assaig en què es van inocular préssecs de la varietat Ross, situats en l'hort experimental, amb una suspensió d'1 x 105 conidias del cep GNRDC de G. candidum provinent de cultius purs de 7 dies. La fruita va ser collida 7 dies després, tractada amb els fungicides (Quadre 3) i incubada en càmera humida.

Aquest assaig va demostrar efectivament la major eficàcia de la metodologia de congelació quan s'utilitza una barreja de fungicides, per determinar la presència del patogen epífitamente sobre la fruita. Totes les barreges van incrementar significativament el recompte de 'G. candidum' que va aconseguir només al 55% dels fruits que no van ser tractats amb fungicides previ al congelamiento (Quadre 5). En aquest cas, 'Rhizopus' va anar efectivament inhibit amb les barreges de fungicides, la qual cosa hauria permès un major desenvolupament dels restants fongs, observant-se no només un major recompte de 'Geotrichum', sinó que a més, un major nombre de colònies de 'Cladosporium' en la fruita tractada amb les barreges, salvo amb la qual va incloure a Iprodione (Quadre 5).

Quadre 5: Percentatge de préssecs Ross amb desenvolupament de colònies de 'Geotrichum candidum' i altres fongs sapròfits, després de ser congelats durant 4 dies (Hort experimental, Universitat de Xile). ^x La comptabilització de cada fong es va realitzar en tots els fruits, permetent que un mateix fruit fos enumerat més d'una vegada. ⁱ Lletres iguals en les columnes indiquen diferències no significatives segons prova de comparació múltiple de Tukey (p < 0,05).

En la Figura 4 s'observa l'abundant creixement dels fongs sapròfits sobre els préssecs prèviament congelats en tots dos testimonis sense fungicides (inoculat i no inoculat). L'abundant creixement expansiu de 'Rhizopus' inhibeix i dificulta el recompte de colònies de 'Geotrichum candidum', així com d'altres fongs. Totes les barreges de fungicides van produir una important inhibició del creixement de 'Rhizopus', així com d'altres sapròfits, permetent visualitzar en molt bona forma el desenvolupament de 'G.candidum' sobre la fruita. La barreja de Dicloran + Pyrimrthanil va generar la major expressió del patogen, no només el que es va desenvolupar en tota la fruita, si no a més el que va tenir un desenvolupament extensiu en cadascun d'ells, sent en conseqüència la barreja seleccionada per a la metodologia de determinació de poblacions epífitas de 'G. candidum' sobre préssecs i nectarinos.

Figura 4: Préssecs Ross amb desenvolupament de colònies de 'Geotrichum candidum' i altres fongs sapròfits, després de ser inoculats, tractats amb diferents barreges de fungicides, congelats durant 4 dies i mantinguts en càmera humida 5 dies més. 1: Testimoni no inoculat sense fungicides; 2: Testimoni inoculat sense fungicides; 3: Dicloran + Imazalil; 4: Dicloran + Iprodione; 5: Dicloran + Pyrimethanil; i 6: Dicloran + Benomyl.

Finalment, per validar la metodologia, es va realitzar un assaig que tendia a determinar la possible variació en els percentatges de fruits amb poblacions epífitas del patogen en poscosecha. Per a això, es van prendre mostres de préssecs de la varietat Sweet September provinents de la collita comercial de dues hortes amb historial de pudrición àcida i dues hortes sense historial de pudrición àcida. La fruita va ser obtinguda en tres etapes del procés de poscosecha, a l'arribada a la planta d'embalatge, a la sortida de l'hidroenfriado i en la caixa embalada, al final del procés d'embalatge. La fruita es va obtenir en la planta embaladora de l'empresa Viconto, situada en Maipo, Regió Metropolitana. En tots els horts amb historial de pudrición àcida es va realitzar una aplicació de Propiconazole en precosecha, mentre que tota la fruita va ser tractada amb hipoclorit de sodi (75 ppm de clor actiu) en l'hidroenfriado i amb fenhexamida (Teldor 500 SC) + Iprodione (Rovral 4 Flo) aplicats al costat de la cera (Primafresh 50 V) en la línia de selecció i embalatge. Es van utilitzar 4 repeticions corresponents a 4 caixes de 44 fruits per cada punt de mostreig i per cada horta. La fruita es va tractar amb Dicloran + Pyrimethanil (Botrán 75 WP 1,5 g/L + Pyrus 400 SC 1,5 cc/L), es va congelar durant 4 dies a -17 °C i va incubar 4 dies en càmeres humides en el laboratori de Fitopatologia de Postcosecha de la Facultat de Ciències Agronómicas de la Univ. de Xile.

A l'arribada a la planta d'embalatge es va observar una notòria diferència en la quantitat de fruits amb poblacions epífitas de 'G. candidum' entre les hortes amb i sense historial de pudrición àcida, sent aquesta més de tres vegades major en els horts amb historial (Quadres 6 i 7). La quantitat de fruita amb presència del patogen no va variar després d'haver estat sotmesa a l'hidroenfriado, evidenciant que no existiria redistribució de l'inoculo en aquest tractament, com ha estat proposat per alguns investigadors. No obstant això, sobre un 96% dels fruits de tots dos tipus d'hort van presentar poblacions epífitas del patogen al final del procés d'embalatge, ratificant que en aquesta part del procés es produeix una redistribució de l'inoculo (Quadre 6 i 7; Figures 5 i 6). La planta en què es va realitzar l'estudi té un estricte protocol i neteja dels equips d'embalatge, la qual es realitza cada vegada que es canvia d'un lot de fruita a un altre, posant una major cura quan es processa fruita d'horts amb historial de pudrición àcida.

Quadre 6: Percentatge de fruits amb poblacions de 'Geotrichum candidum' i altres fongs sapófitos en tres etapes de postcosecha en préssecs Sweet September (mitjana de dos horts amb historial). ^x La comptabilització de cada fong es va realitzar en tots els fruits, permetent que un mateix fruit fos enumerat més d'una vegada. ⁱ Lletres iguals en les columnes indiquen diferències no significatives segons prova de comparació múltiple de Tukey (p < 0,05).

La informació obtinguda en aquest estudi permet inferir que la redistribució de l'inòcul no ocorre exclusivament entre la fruita de diferents lots, sinó que a més es produeix entre els fruits d'un mateix lot i dependrà molt probablement de la quantitat d'inòcul present en cada lot. En aquest cas, lots provinents amb un 23% de fruits contaminats arriben a gairebé un 100% de fruits contaminats al final de la línia d'embalatge. No obstant això, com ja es va indicar anteriorment, a pesar que la major part de la fruita presenta inòcul del patogen, només una part d'ella normalment desenvolupa pudrición àcida. A causa que el patogen requereix de ferides per penetrar els fruits i iniciar les pudriciones, és de summa importància manejar les condicions de manipulació, conservació i transport en postcosecha per reduir la incidència de la malaltia ja que és presumible que el patogen es trobi present sobre gran part de la fruita.

Quadre 7: Percentatge de fruits amb poblacions de 'Geotrichum candidum' i altres fongs sapófitos en tres etapes de postcosecha en préssecs Sweet September (mitjana de dues hortes sense historial). ^x La comptabilització de cada fong es va realitzar en tots els fruits, permetent que un mateix fruit fos enumerat més d'una vegada. ⁱ Lletres iguals en les columnes indiquen diferències no significatives segons prova de comparació múltiple de Tukey (p < 0,05).

Figura 5: Desenvolupament de 'Geotrichum candidum' en tres etapes de postcosecha en préssecs Sweet September provinents d'un hort sense historial de pudrición àcida (horta Fernando Zagal). 1: bins arribada a planta, 2: sortida d'hidroenfriado i 3: caixa embalada.

Figura 6: Desenvolupament de 'Geotrichum candidum' en tres etapes de postcosecha en préssecs Sweet September provinents d'una horta amb historial de pudrición àcida (horta El Resguard). 1: bins arribada a planta, 2: sortida d'hydroenfriado i 3: caixa embalada.

La metodologia descrita en aquest treball permet conèixer els nivells de contaminació que porta la fruita des del camp i pot ser utilitzada com un protocol de predicció de la pudrición àcida. Però addicionalment, aquesta metodologia pot ser utilitzada per determinar l'efecte de diverses pràctiques, realitzades en l'horta, destinades a minimitzar l'inòcul del patogen sobre la fruita.

Finalment, d'acord als resultats obtinguts en els diversos assajos realitzats és possible concloure que el control de la pudrición àcida de la fruita d'os s'aconsegueix integrant mesurades d'horta i de poscosecha. A nivell de l'horta és necessari evitar al màxim la producció de pols en els camins, que permet en gran mesurada l'arribada de l'inòcul a la fruita, i realitzar els tractaments químics amb fungicides efectius el més prop de la collita possible. En poscosecha, si ben els resultats presentats mostren una baixa efectivitat de la desinfecció de les instal·lacions d'embalatge, aquesta no pot eliminar-se, sinó incrementar-se. Les mesures que en major mesura impactaran l'ocurrència de la malaltia, no obstant això, són el procurar collir la fruita amb el grau de maduresa òptim que permeti un magatzematge i transport de la fruita sense que es produeixin ferides en ella i realitzar un maneig acurat de la fruita durant l'emmagatzematge i el transport.

Bibliografia

• Michailides, T. J. and Morgan, D. P. 2004. First Report of Sour Rot of Califòrnia Peaches and Nectarines Caused by Yeasts. Plant Disease 88 (2): 222.
• Ogawa, J., Zehr, I. i Bird, G. 2000. Plagues i malalties dels fruiters d'os. American Phytopathol Society, EUA. 168 p. Disponible en: http://books.google.com/books?id=jpeqjzg_tqsc&pg=PA17&dq=GEOTRICHUM+CANDIDUM&lr=&hl=és. Llegit el 16 de desembre de 2008.
• Pinilla, B. 2005 a. Eficiència de fungicides 'in vitro' en la inhibició del fong Geotrichum candidum agent causal de la pudrición acidifica en préssecs. XV Congrés de la Societat Xilena de Fitopatologia. Facultat d'Agronomia, Universitat de Tarapacá. Arica, Xile. 15-18 desembre, 2005.
• Pinilla, B. 2005 b. Fuentes d'inòcul de la pudrición àcida causada per Geotrichum candidum en préssecs. XV Congrés de la Societat Xilena de Fitopatologia. Facultat d'Agronomia, Universitat de Tarapacá, Arica, Xile. 15-18 desembre, 2005.
• Yaghmour, M.A., Bostock, R.M., Morgan, D.P. i Michailides, T.J. 2012. Biology and sources of inoculum of Geotrichum candidum causing sour rot of peach and nectarine fruit in Califòrnia. Plant disease 96:204-210.