Ventajas de la emulsión Se prepararon en nuestro laboratorio emulsiones de las micobacterias en diferentes aceites: aceite de oliva, aceite mineral, aceite de soja y en un lípido que recibe el nombre de escualeno, que se utiliza ya en la formulación de vacunas y es uno de los componen- tes minoritarios del aceite de oliva virgen. Con estas preparaciones se estudió si se formaban agregados más pequeños de las micobacterias y si éstas seguían manteniendo sus propiedades anticancerígenas. No todas las emulsiones consiguieron disgregar los gru- mos de micobacterias. Aquellas que no cumplieron este primer requisito se descartaron en esta primera fase del estudio (ver tabla 1). Así que sólo se continuó con las emulsiones de micobacterias en aceite mineral y en aceite de oliva. Posteriormente, se realizaron estudios de la capaci- dad antitumoral de las micobacterias emulsionadas en estos dos aceites en comparación con las mico- bacterias en su formulación habitual. En este caso, se observó que las micobacterias emulsionadas en aceite de oliva demostraron una mayor capacidad de estimular la respuesta inmunológica que las micobac- terias no emulsionadas (ver tabla 1). Recuérdese que estamos hablando de inmunoterapias, con lo cual es muy importante que se observe este efecto inmuno- estimulador. Por tanto, para los siguientes estudios realizados se continuó solamente con las micobacte- rias emulsionadas en aceite de oliva. Figura 3. Representación de las micobacterias en solución acuosa y emulsionadas en aceite de oliva. a) En verde más oscuro se representa la envuelta de lípidos que recubre las micobacterias. b) Arriba se representan las micobacterias no emulsionadas, es decir, en un líquido acuoso. Se puede ver cómo las micobacterias se encuentran formando agregados. En la parte inferior se representa cómo quedan cubiertas de aceite de oliva las micobacterias y que los agregados que se forman son más pequeños. Los estudios preclínicos se realizaron en el modelo de cáncer de vejiga en ratón (in vivo). En estos expe- rimentos se observó que todos los animales con cáncer de vejiga que fueron tratados con M. brumae emulsionado en aceite de oliva conseguían sobrevivir. Estos resultados mejoraban el tratamiento utilizado habitualmente: sobrevivieron el 65% de los animales tratados con el BCG en solución acuosa (ver tabla 1). Cabe destacar que nunca antes en este modelo animal de la enfermedad se había conseguido mejorar el tratamiento con BCG, utilizando una bacteria no patógena. Finalmente, se estudiaron las características físico- químicas de la emulsión en aceite de oliva de las micobacterias. Es sabido que lo primero que tiene que pasar para que la BCG pueda hacer su acción antitumoral en los pacientes es que tiene que haber un contacto físico entre la micobacteria y las células que recubren la superficie interna de la vejiga (ver figura 1b). Hay una serie de factores que influyen en que esta interacción se produzca en mayor o menor intensidad, fuerza y/o rapidez. En primer lugar, la capa superficial de la vejiga tiene una carga negativa, por lo que la interacción entre ella y la micobacteria se verá favorecida si tienen cargas opuestas. Se ha estudiado la carga de las micobacterias en su formulación habi- tual y cuando están emulsionadas en aceite de oliva, y se ha observado que la interacción se vería favorecida cuando las bacterias están en aceite de oliva (ver tabla Salud Parámetros Ideal Micobacterias emulsionadas en aceite de oliva Micobacterias no emulsionadas Propiedades antitumorales Respuesta del sistema inmunológico ++ + ++ + ++ Capacidad antitumoral ++ + ++ + ++ Caracterización Agregación -- - + ++ Carga + - -- Unión a bronectina ++ + ++ + ++ “+ + +”, muy alta; “+ +”, bastante alta; “+”, alta; “-”, baja; “- -”, bastante baja; “- - -”, muy baja Tabla 1. Comparación entre las características ideales que tendría que tener el tratamiento del cáncer de vejiga para una máxima efectividad, las características de las micobacterias emulsionadas y no emulsionadas. 73