2004). El tercer ensayo consiste en la inoculación con una solución de esporas del hongo sobre plantones con brotaciones jóvenes uni- formes y posterior incubación durante varios días en condiciones favorables para el desarrollo de la enfermedad. Esta metodología es más fiable que las inoculaciones de hojas in vitro, ya que permite identificar claramente tanto las variedades sensibles como las resistentes (Vicent et al. 2012). Desarrollo de marcadores moleculares para la selección de híbridos resistentes a ABS Para mejorar la eficiencia y rapidez en la selección de híbridos resistentes dentro del programa de mejora genética de manda- rinos del IVIA, se han desarrollado por primera vez marcadores moleculares asociados a la resistencia a ABS. Para ello, se evaluó la respuesta a la enfermedad de tres poblaciones de híbridos diploides y triploides obtenidos mediante cruzamientos entre el parental susceptible 'Fortune' y una variedad resistente (Aa X aa). En una primera fase, los híbridos triploides fueron analiza- dos mediante un panel de 1.536 marcadores moleculares de tipo SNP (Single Nucleotide Polymorphism), detectando una región en el cromosoma III altamente ligada a la respuesta de los híbri- dos a la enfermedad. En el siguiente paso se desarrollaron nuevos marcadores moleculares en la región identificada para analizar una población diploide. Los resultados obtenidos permitieron identificar una región de 3,3 Mb cerca del centrómero del cromo- soma III asociada con la susceptibilidad a ABS, y se identificaron dos marcadores a ambos lados del gen (Cuenca et al., 2013). Finalmente, se desarrollaron nuevos marcadores de tipo SNP entre los dos marcadores identificados previamente, que fueron analizados en una población de 300 híbridos diploides con el fin de realizar un mapeo fino de la región. Como resultado, se redujo la región asociada a la susceptibilidad a ABS a 266 kb y se iden- tificaron marcadores a 0,4 cM y 0,7 cM a ambos lados del gen. El marcador más próximo al gen, SNP08, fue desarrollado para su utilización como marcador de selección de híbridos resistentes a ABS (Cuenca et al., 2016). Este marcador permite una eficiencia de selección del 99.6%, es decir, sólo en 4 de cada 1.000 híbri- dos analizados el resultado obtenido no se correspondería con la respuesta del híbrido a la infección por Alternaria. Además, si se utiliza conjuntamente con otro marcador cercano al gen, la eficiencia de selección aumenta hasta el 99,97%. La utilización de este marcador molecular permite descartar los híbridos susceptibles dentro de las poblaciones obtenidas; sin embargo, no permite discriminar entre diferentes grados de susceptibi- lidad que puedan existir en los diferentes híbridos, por lo que potencialmente se descartan híbridos que genéticamente son susceptibles, aunque su cultivo en campo no supusiera un pro- blema debido a su baja sensibilidad. No obstante, este marcador permite la selección de híbridos genéticamente resistentes y se asegura que no mostrarán síntomas de la enfermedad producida por los patotipos de Alternaria alternata conocidos actualmente. 33 CÍTRICOS Figura 1. Resultados de los análisis mediante el marcador molecular SNP08 que permite la discriminación entre variedades resistentes y susceptibles, identificando la presencia de los alelos del gen de susceptibilidad a ABS de tipo AA y de tipo Aa. (I) Análisis de diferentes variedades comerciales; (II) Análisis de una población de 60 híbridos triploides procedente de un cruzamiento Aa X aa, obteniendo un 38% de híbridos resistentes.