43 PROTEÍNAS Descripción de la sustancia a ensayar Diversos estudios han demostrado que algunas fitocis- tatinas actúan como agentes de defensa frente a plagas y enfermedades; además, juegan un papel importante a nivel endógeno relacionado con el intercambio proteico y la muerte celular programada. Dichas moléculas actúan como inhibidores de proteasas y son por lo general pro- teínas de pequeño tamaño. Se han identificado en teji- dos de reserva de semillas y tubérculos además de estar presentes en ciertos órganos aéreos de diversas plantas (De Leo y col., 2002). También se ha podido demostrar que existe un proceso de inducción en la síntesis de estos compuestos por parte de las plantas como res- puesta al daño producido por artrópodos y patógenos (Ryan, 1990). Las fitocistatinas están llamadas a ser un significativo agente de control y pueden desempeñar un papel im- portante en las estrategias de defensa de las plantas, ya que además de regular las pro-teasas endógenas son capaces de interferir en el proceso digestivo de los ar- trópodos fitófagos cau-sando una reducción de la dispo- nibilidad de aminoácidos necesarios para su crecimiento y desa-rrollo (Lawrence y Koundal, 2002). En relación con su función de defensa, se han estudiado los efectos de una cistatina sobre la araña roja (Tetrany- chus urticae), perteneciente al orden Acari y a la familia Tetranychidae. Se trata de un ácaro fitófago y muy polí- fago del que se tiene constancia que ataca a más de 200 especies vegetales, muchas de ellas con interés agrícola, siendo sus enzimas digestivos más abundantes de tipo cisteín proteasa, dianas potenciales de las cistatinas. Los ensayos de inhibición con PhyCys purificada como pro- teína expresada en Escherichia coli, han demostrado que esta proteína es capaz de inhibir las cisteín proteasas presentes en los tractos salivares y digestivos de este artrópodo fitófago. El resultado obtenido indica que la PhyCys actúa como una proteína antimetabólica que interfiere en el proceso de digestión del ácaro, produciendo una disminución de la asimilación de aminoácidos esenciales y por tanto se revela como una herramienta útil para el desarrollo de acaricidas contra esta especie. Seipasa realizó la producción de un extracto rico en PhyCys, disponiendo para ello de una cepa propia de E. Coli modificada genéticamente para expresar la PhyCys. Según nuestros ensayos, la purificación no es necesaria para conseguir extractos celulares con una actividad su- ficientemente elevada como para ser utilizada en las pruebas de campo. Posteriormente se repitieron los pasos del protocolo de cultivo y condiciones de induc- ción en matraz, junto con la lisis y liofilización del extracto celular sobre la misma cepa de E. Coli pero sin modificar, con el fin de evaluar la actividad del extracto sin induc- ción de PhyCys frente a la actividad del extracto proteico donde se ha expresado la proteína a evaluar. Puesto que la eficacia de la proteína reside en la inges- tión de esta por parte del ácaro, cada una de las tesis a comparar se aplicó sola y junto con un tensioactivo de la familia de los alquilpoliglucósidos (caracterizados por su perfil “verde”) que asegurase una correcta distribución de la proteína sobre la superficie foliar. Materiales y métodos Localización Centro experimental de Seipasa. Sector 13. L’Alcudia (Valencia). Ensayo realizado a finales de verano de 2013. Objetivos Determinación de la actividad específica, eficacia y se- lectividad de un grupo de proteínas presentes en el ex- tracto proteico EP-506 para evaluar la capacidad de control sobre poblaciones de T. urticae. Diseño experimental El cultivo escogido para estudiar la eficacia del extracto proteico PhyCys fue un cultivar enano de judía conocido como Red Kinsey; sus propiedades agronómicas ofrecí- an una serie de ventajas experimentales tales como la velocidad de crecimiento, la susceptibilidad frente a araña roja y un manejo más sencillo en las evaluaciones de individuos vivos. El cultivo se sembró en maceta y fue criado en condicio- nes controladas de riego y nutrición con tal de obtener un estado sanitario y de desarrollo óptimo. El diseño ex- perimental se realizó en bloques al azar con 7 tratamien- tos y 4 repeticiones de forma que permitiera conocer, por análisis comparativo, el efecto antialimenticio debido única y exclusivamente a la actividad de un grupo con- creto de proteínas. tecnología