23 Metodología para la evaluación de la tolerancia a M. laxa en melocotonero Los cultivares de melocotonero [Prunus persica (L.) Batsch] estudiados proceden de las colecciones de germoplasma y poblaciones de mejora de la Esta- ción Experimental de Aula Dei-CSIC (Zaragoza). Los genotipos evaluados corresponden a las variedades ‘Catherina’, ‘Venus’ y ‘Calante’, y a descendientes de las poblaciones ‘BabyGold 9’ x ‘VAC-9510’ y ‘BabyGold 9’ x ‘Crown Princess’. El método consiste en la inoculación in vitro de los genotipos con Monilinia laxa. El inóculo original de M. laxa fue proporcionado por la Unidad de Patología del Irta (Lleida) en placas Petri con medio PDA (Figu- ra 3A). Para la obtención de esporas se inocularon frutos, previamente desinfectados, con una róndela de 3 mm de medio de cultivo (PDA) de una colonia de M. laxa de 6 días de crecimiento. Los frutos se deposi- taron en cajas de cartón comerciales cubiertas con una capa de celofán transparente estéril y los extre- mos ligeramente cerrados con cinta adhesiva. Se in- cubaron a una temperatura de 23 °C, con 50-60% de humedad relativa, y bajo un fotoperiodo de 12 horas de luz y 12 horas de oscuridad. Posteriormen- te, se aislaron las esporas y su concentración se midió con un citómetro al microscopio (Figura 3B-C). En campo, se cosecharon veinticinco frutos sanos y maduros de cada genotipo que se desinfectaron durante 4 minutos por inmersión en una solución al 1,6% alcohol etílico, 1,6% hipoclorito de sodio (comercial), y 0,005% de Tween 80 en agua estéril. Posteriormente, se aclararon con agua estéril y se dejaron secar al aire al menos durante 20 minutos. Para la inoculación con heridas y esporas se realizó una lesión artificial (1 mm x 2 mm) en la posición ecuatorial del fruto, y sobre la herida se inoculó con 25 μL de una suspensión de esporas de concentra- ción 25x103/ml (Figura 3D). Los frutos se deposi- taron en cajas de cartón comerciales cubiertas con una capa de celofán transparente estéril y los ex- tremos ligeramente cerrados con cinta adhesiva. Se incubaron a una temperatura de 23 °C (12 h día/ 12 h noche) y con 50-60% de humedad relativa (Figura 3E).